Предельно допустимая концентрация сапонина в воде водоемов 0,2 мг/л, лимитирующий показатель вредности органолептический.
Определение методом тонкослойной хроматографии
Принцип метода. Метод основан на гидролизе сапонина в 2 н. хлористоводородной кислоте, экстракции хлороформом образовавшегося сапогенина и последующем выделении его на пластинках «Силуфол» в системе этиладетат-бензол. Количественное определение проводят, сравнивая интенсивность окраски и площадь пятен пробы и стандартных растворов.
Предел обнаружения 0,2 мг/л (0,02 мг в пробе).
Сахара определению не мешают.
Реактивы. 1. Хроматографические пластинки «Силуфол» размером 8x12 см.
2. Хлористоводородная кислота пл. 1,19 г/см3.
3. Подвижный растворитель — смесь этилацетата и бензола в соотношении 1:1.
4. Проявляющий реактив — хлорид сурьмы(Ш), насыщенный раствор в хлороформе.
5. Стандартный раствор сапонина с содержанием 0,1 мг/мл.
Ход определения. В колбу для гидролиза с обратным холодильником помещают 100 мл исследуемой воды, прибавляют 20 мл хлористоводородной кислоты пл. 1,19 г/см3 и кипятят в течение 1 ч. После охлаждения образовавшийся сапогенин экстрагируют дважды хлороформом порциями по 15 мл. Хлороформный экстракт упаривают в фарфоровой чашке на водяной бане при 50—60 °C до объема менее 0,5 мл. Аналогично обрабатывают 2—3 стандартных раствора с содержанием сапонина 0,02—0,1 мг в 100 мл дистиллированной воды.
С помощью капилляра или микрошприца наносят весь сконцентрированный экстракт пробы на пластинку «Силуфол» и рядом на эту же пластинку стандартные растворы сапонина (гидролизованные и сконцентрированные). Пластинку помещают в хроматографическую камеру, в которую за 30 мин до этого наливают подвижный растворитель этилацетат — бензол (1:1). После того как фронт растворителя поднимется на высоту 10 см, пластинку вынимают, сушат на воздухе до удаления растворителя и проявляют насыщенным раствором хлорида сурьмы(Ш) в хлороформе с последующим экспонированием при 110 °С в течение 10 мин.
В присутствии сапонина на пластинке проявляются пятна серо-сиреневого цвета с Rf 0,65—0,70. Количественное определение проводят, сравнивая площадь пятен и интенсивность окраcки пробы и стандартных растворов.
Концентрацию сапонина (мг/л) рассчитывают по формуле:
Х = А/V или X = A*S/V*Sст,
где А — содержание сапонина в стандартном растворе, мкг; Sст, S — площадь пятна этого стандартного раствора и пробы, мм2; V — объем пробы, взятой для анализа, мл.